免疫球蛋白試劑盒復(fù)蘇操作流程: 1.準(zhǔn)備工作,開水浴鍋,預(yù)熱試劑,超凈工作臺(tái)紫外照射30min,找到對(duì)應(yīng)細(xì)胞在液氮罐中的位置。
2.紫外照射后風(fēng)機(jī)吹10min后,酒精擦拭臺(tái)面,放入試劑和離心管,取15ml離心管,加入9ml培養(yǎng)液。
3.在液氮罐中取出細(xì)胞,先擰松放液氮,再擰緊,將凍存管放入PE手套中,然后水浴融化后取出,1-2min。
4.將凍存管噴酒精后放入超凈臺(tái)內(nèi),擦干管壁,用1ml頭將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到已加培養(yǎng)液的離心管中。
5.800-1000rpm離心5min,注意配平。
6.將離心好的細(xì)胞棄上清,加入5ml*培養(yǎng)基重懸,用移液管吹打8-10次,避免產(chǎn)生氣泡,將細(xì)胞懸液接種到10cm培養(yǎng)皿中,補(bǔ)加5ml培養(yǎng)液。
7.混勻,十字法或者8字法。將混好的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
免疫球蛋白試劑盒選擇和使用需要注意的問題:
1.試劑的選擇:選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的,但是在檢測之前還應(yīng)該提前半個(gè)小時(shí)將試劑拿到常溫下進(jìn)行解凍。
2.加樣中可能遇到的問題:在做血清或是血漿用于檢測試劑的時(shí)候,會(huì)碰到血清血漿不好分離的情況,這個(gè)時(shí)候的解決辦法是先放在常溫中1到2小時(shí),然后在進(jìn)行離心處理。
3.終止反應(yīng):在加終止劑的時(shí)候由于傾倒速度快,差生氣泡,造成假陽性結(jié)果。所以在倒終止劑的時(shí)候要緩慢倒。
4.顯色問題:使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時(shí)間太長,都有可能造成顯色劑不顯色。所以在進(jìn)行顯色反應(yīng)的時(shí)候,要先查看顯色劑本身的情況。
5.洗板時(shí)容易造成誤差:因?yàn)橄窗迨侨斯は吹?,所以判斷什么時(shí)候洗干凈了也是人為判斷的,這個(gè)時(shí)候帶有主觀色彩,所以多清洗幾次,還有就是在洗的時(shí)候孔與孔之間的液體容易交叉流動(dòng)。
6.讀板:讀板的時(shí)候首先應(yīng)該保證板的清潔干凈。