ELISA試劑盒總是需要時(shí)刻保溫,主要因?yàn)镋LISA屬固相免疫測(cè)定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標(biāo)本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī),只需靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個(gè)逐步平衡的進(jìn)程,因而需經(jīng)分散才干到達(dá)反響的終點(diǎn)。
在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反響的完結(jié)需求有一定的溫度和時(shí)刻,這一保溫進(jìn)程稱(chēng)為溫育,有人稱(chēng)之為孵育,在試劑盒中似不恰當(dāng)。
保溫的方法除有的ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將其置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,終將ELISA板放在濕紗布上。
濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時(shí)分更應(yīng)如此。無(wú)論是水浴仍是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響,操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)厲限制在規(guī)則的范圍內(nèi),規(guī)范室溫溫度是指20~25℃,但具體操作時(shí)可根據(jù)說(shuō)明書(shū)的要求操控溫育。
室溫溫育時(shí),試劑盒只需平置于操作臺(tái)上即可。應(yīng)留意溫育的溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求準(zhǔn)確。為確保這一點(diǎn),一個(gè)人操作時(shí),一次不宜多于兩塊板一起測(cè)定。
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