臻科生物帶你了解ELISA的樣本收集與前期準(zhǔn)備

        利用ELISA進(jìn)行臨床檢驗(yàn)常見的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。

(一) 臨床樣本的收集

A、血液樣本

    有些生理因素，如吸煙、進(jìn)食、運(yùn)動(dòng)、情緒波動(dòng)、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素。

1．外周血

    一般選取左手無名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應(yīng)無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指部位代替。對(duì)燒傷病人，可選擇皮膚完整處采血。由于部分血液常規(guī)檢測(cè)（如白細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類等）受生理因素影響波動(dòng)過大，比較時(shí)宜使條件盡量一致。涉及到體內(nèi)出、凝血功能的檢測(cè)項(xiàng)目（如血小板計(jì)數(shù)，出血時(shí)間或凝血時(shí)間等）的檢測(cè)，一定要注意了解患者是否用過抗凝、促凝藥物，以便在減少或避免干擾因素的影響。

2．靜脈血

    除涉及各種止血和血栓檢測(cè)等項(xiàng)目需采用抗凝靜脈血血漿外，目前絕大多數(shù)檢測(cè)項(xiàng)目的分析檢測(cè)可直接采用靜脈血的血清。在血清檢測(cè)項(xiàng)目中，有些（如血糖，血脂等）受飲食及晝夜因素影響較大，一般以清晨空腹血標(biāo)本為宜；有些在血中衰變較快（血清酶活性測(cè)定如ACP活性等），0~4℃貯存活性減弱也不一，這些項(xiàng)目的檢測(cè)必須及時(shí)而快速；有些（如肌酸激酶等）受運(yùn)動(dòng)等因素影響較大。抽血時(shí)避免溶血的發(fā)生也十分重要，尤其涉及血鉀，LDH等的測(cè)定。

B、尿液樣本

    同血標(biāo)本一樣，尿液標(biāo)本受飲食、運(yùn)動(dòng)、藥物量等因素的影響也較大，特別是飲食的影響，故一般來說晨尿優(yōu)于隨機(jī)尿。晨尿是指清晨起床后的次尿標(biāo)本，較濃縮和酸化，有形成分（如血細(xì)胞，上皮細(xì)胞，管形）相對(duì)集中便于觀察。隨機(jī)尿即隨意一次尿，留取方便，但受飲食、運(yùn)動(dòng)、藥物影響較甚，易于出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果，如飲食性蛋白尿，飲食性糖尿，維生素C干擾潛血結(jié)果等。餐后尿（午餐后2小時(shí)收集的患者尿液）適用于尿糖，尿蛋白和尿膽原的檢查，此時(shí)的尿標(biāo)本可增加試驗(yàn)敏感性，檢出較輕微的病變。12小時(shí)尿細(xì)胞計(jì)數(shù)即Addis計(jì)數(shù)（前晚8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液），因時(shí)間較長(zhǎng)，細(xì)菌易繁殖，須加入防腐劑甲醛。24小時(shí)尿（天晨8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液）中化學(xué)物質(zhì)的定量，包括蛋白，糖，尿17-酮、17-羥類固醇，兒茶酚胺，Ca2+等，檢測(cè)不同的物質(zhì)，選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細(xì)菌培養(yǎng)，要求無菌，沖洗外陰后留取標(biāo)本。

C、糞便樣本

    糞便標(biāo)本的檢測(cè)對(duì)判斷消化系統(tǒng)疾病有重要參考價(jià)值。采集時(shí)要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便，對(duì)外觀無異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材。找寄生蟲蟲體及作蟲卵計(jì)數(shù)應(yīng)收集24小時(shí)糞便。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體應(yīng)于排便后立即檢查，從有膿血和稀軟處取材，保溫送檢。查日本血吸蟲蟲卵時(shí)應(yīng)取粘液、膿血部分，孵化毛蚴時(shí)至少留取30g糞便，且需盡快處理。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚12時(shí)或清晨排便前自肛門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢。隱血試驗(yàn)（化學(xué)法），試驗(yàn)前3日禁食肉類及含動(dòng)物血食物并禁服鐵劑，維生素C等。所有糞便標(biāo)本采集后1小時(shí)內(nèi)應(yīng)檢查完畢，以防止有形成分受消化酶及pH的破壞。以上針對(duì)臨床樣本指標(biāo)檢測(cè)。

D、腦脊液樣本

    腦脊液標(biāo)本采集后立即送檢，放置過久將影響檢驗(yàn)結(jié)果：如細(xì)胞變性，破壞，導(dǎo)致計(jì)數(shù)和分類不準(zhǔn)；有些化學(xué)物質(zhì)如葡萄糖等將分解含量減少；細(xì)菌發(fā)生自溶影響細(xì)菌的檢出率。腦脊液抽取后一般分裝三個(gè)無菌管，管作細(xì)菌培養(yǎng)，第二管作化學(xué)分析和免疫學(xué)檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查，三管的順序不宜顛倒。因標(biāo)本采集較難，全部送檢和檢測(cè)過程應(yīng)注意安全。

E、胸腹水樣本

    與腦脊液標(biāo)本一樣，采集后的標(biāo)本注意安全，及時(shí)送檢。一般也分裝三管，一管作常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查，一管生化檢查，一管細(xì)菌培養(yǎng)，順序以與腦脊液相同為宜。

F、前列腺液樣本

    前列腺液標(biāo)本由前列腺按mo后采集，液量少時(shí)直接滴在載玻片上及時(shí)送檢，須注意防止標(biāo)本蒸干，量多時(shí)收集在潔凈干燥的試管中。若按mo不出前列腺液，可檢查按mo后的尿液沉渣。

G、精液樣本

    精液標(biāo)本采集前應(yīng)禁欲3~7天，排凈尿液后可用手yin法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中，保溫并及時(shí)送檢。由于精子生成日間變動(dòng)較大，一般應(yīng)檢查2~3次（每次間隔1~2周）方可做診斷。

H、陰道分泌物樣本

    陰道標(biāo)本采集前24小時(shí)應(yīng)禁止房事、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等，取材所用器械需清潔。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材，制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標(biāo)本，經(jīng)期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標(biāo)本。

(二) ELISA的樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行

檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的，zui好-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    液體類標(biāo)本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3. 尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

5. 培養(yǎng)細(xì)胞

    檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

6. 組織標(biāo)本

    切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑,

用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

 組織標(biāo)本

    切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

1，對(duì)于樣本要求保持鮮重

2，稱取樣本中的重量不小于50mg，一般以1g為基準(zhǔn)

3，勻漿的比例選取10%，相當(dāng)于1g組織加9ml的勻漿液來進(jìn)行勻漿

4，勻漿液選取PBS（PH=7.2-7.4，濃度為0.01mol/L）

選用組織勻漿器或者碾缽進(jìn)行組織勻漿！

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